实验介绍： 

为了验证不同营养体系培养的SH-SY5Y细胞形态的差异，并筛选出合适的培养体系。我们设计了两组实验，通过CELLImage Mini全自动活细胞成像仪动态监测实验过程对比两种营养体系培养的SH-SY5Y细胞形态。体系1是DMEM+10%FBS+1%双抗培养基，体系2是DMEM/F12+ 10%FBS+1%双抗培养基。

    实验时间：2025年06月20日 14：10-15：13

    实验设备及厂家：CELLImage Mini全自动活细胞成像仪（联庆瑞奇）、离心机（国产）、恒温水浴锅（国产）

    实验耗材及厂家：六孔板（国产）

    实验试剂：DMEM培养基（逸漠生物）、DMEM/F12培养基（逸漠生物）、胎牛血清（逸漠生物）、青链霉素溶液（逸漠生物）、胰蛋白酶（逸漠生物）

    细胞类型：SH-SY5Y（逸漠生物）

  实验步骤： 

  （1）观察细胞：将两种培养体系下的细胞分别放置于CELLImage Mini全自动活细胞成像仪观察细胞的状态及密度，细胞融合度达到 70%-90%即可进行传代。

  （2）收集细胞：将细胞原有培养液分别收集于15ml离心管，用 1×PBS洗涤细胞两次，加入适量胰酶溶液，室温消化0.5-1min，细胞明显脱离立即终止消化。

  （3）离心重悬：将细胞于1000rpm离心5min后，加入对应培养基进行重悬。

  （4）细胞铺板：将细胞分别按照1:2的比例分别传代铺板至六孔板中，加入对应的培养基，做好标记。

  （5）细胞培养监测：在将细胞培养板放置于37°C、5%CO2 饱和湿度培养箱内培养，用CELLImage Mini全自动活细胞成像仪对细胞每间隔60min进行一次优化对焦图像采集，持续监测细胞直至下一次传代。

  实验结果及分析： 

  （1）通过CELLImage Mini全自动活细胞成像仪连续监测，分别对两种体系下培养的SH-SY5Y第2天和第4天相应的形态观察。传代第2天，低密度下，两种营养体系培养的SH-SY5Y形态没有明显差异，均为少数悬浮，多数呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于聚团生长；传代第4天，体系1培养的SH-SY5Y细胞轮廓较为纤细，出现部分细胞调亡，细胞没有很明显聚团现象，体系2培养的SH-SY5Y细胞部分聚团（符合SH-SY5Y本身有聚团生长特性），细胞形态正常。根据形态学监测结果来看，DMEM/F12 + 10%FBS+1%双抗培养基更适合培养SH-SY5Y。（如下图所示）

体系1是DMEM+10%FBS+1%双抗培养基，体系2是DMEM/F12+ 10%FBS+1%双抗培养基

  （2）通过Readcels分析软件对两个培养体系下的SH-SY5Y连续监测图像进行分组分析生成生长曲线，并通过其计数功能对细胞计数结果综合分析。根据融合率分析合成的生长曲线发现培养体系1比培养体系2融合度更高，但是细胞计数培养体系2培养细胞数量高于培养体系1。因此培养体系2培养的SH-SY5Y更符合其喜欢聚团生长，镜下观察融合率不高，细胞簇实际密度大的特性。

两种培养体系生长曲线图

两种培养体系细胞数量柱状图

  实验总结： 

CELLImage Mini全自动活细胞成像仪不仅能够动态监测细胞实验全程的生长变化信息，揭示细胞杀伤、分裂、迁移等生命活动的细微变化过程，记录实验过程中关键信息，实现动态研究调控物质对细胞的影响；而且支持红绿蓝三通道荧光拍摄，对于一些稳转细胞株构建、监测细胞荧光表达、凋亡监测、荧光染料染色实验帮助极大。活细胞动态监测技术实验全程不耗费人力，所有细胞图像的拍摄记录都可以由设备独立完成，实现全自动，高通量，长期稳定性和低干扰的结合。