1.3T3-L1细胞背景介绍：

  小鼠成纤维细胞是来源于小鼠中胚层结缔组织的贴壁间充质细胞，包含胚胎成纤维细胞 MEF、皮肤及各器官来源原代成纤维细胞和 3T3-L1、L929 等永生细胞系，呈梭形贴壁生长、高表达波形蛋白，具备合成胶原等细胞外基质、参与组织损伤修复、纤维化进程及免疫调控的生理功能，因取材方便、培养简易、增殖稳定、遗传背景清晰，是干细胞饲养层构建、基因编辑、纤维化与肿瘤微环境机制研究、药物筛选及再生医学领域最经典的模式细胞之一。

 

2.3T3-L1细胞信息简介：

  中文名称 ：小鼠成纤维细胞；

  细胞简称 ：3T3-L1；

  细胞形态 ：成纤维细胞样；

  生长特性 ：贴壁生长；

  传代比例：1:2~1:3；

  换液频率：3次/周；

  培养环境 ：5%CO2 在37℃培养；

  冻存条件 ：无血清冻存液 冻存于液氮；

  完全培养基 ：90%DMEM+10% CS＋1% P /S。

 

3.3T3-L1细胞传代实验：

  实验时间：2026年04月30日 15：10-16：13；

  实验设备及厂家：CELLImage Mini全自动活细胞成像仪、离心机、恒温水浴锅；

  实验耗材及厂家：六孔板；

  实验试剂：培养基、小牛血清、青链霉素溶液、胰蛋白酶；

  细胞类型：3T3-L1。

3.1 3T3-L1细胞传代步骤：

  （1）实验准备：将配好的完全培养基和胰蛋白酶从2-8℃ 中取出放置到水浴箱预热30 min 左右。并对生物安全柜紫外照射消杀30min；

  （2）观察细胞：将细胞放置于CELLImage Mini全自动活细胞成像仪观察细胞的状态及密度，细胞融合度达到 80%-90%即可进行传代；

  （3）洗涤细胞：将六孔板里的原有培养液收集于15ml离心管，用 1×PBS洗涤细胞两次，去除残余的培养液和血清；

  （4）消化细胞：每孔加入200ul胰酶溶液，室温消化3-5min，轻轻拍打六孔板两侧会有细胞明显脱离，立即终止消化；

  （5）终止消化：加入2ml完全培养液终止消化，吹打六孔板底 2-3 次使所有细胞彻底脱壁。将细胞悬浮液到 15 mL 离心管中，做好标记；

  （6）细胞离心：在室温条件下，将细胞于1000rpm离心5min；/p>；

  （7）细胞重悬：离心后，在生物安全柜内小心倒去上清，用吸管吸取2 mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液；

  （8）细胞计数：取少量单细胞悬液进行台盼蓝染色，于CELLImage Mini全自动活细胞成像仪进行拍照计数；

  （9）细胞传代：根据计数结果，将3T3-L1细胞传入六孔板中，每孔补足2ml完全培养基（本次传代密度较低）。

3.2 细胞培养及监测：

  在六孔板对应孔写上细胞名称、日期，放置37°C、5%CO2 饱和湿度培养箱内培养。用CELLImage Mini全自动活细胞成像仪对细胞每间隔60min进行一次图像采集，持续监测细胞直至下一次传代，共计监测142小时。

3.3 3T3-L1实验结果图像展示:

  3.3.1下图依次是0h/12h/24h/36h/48h//72h/96h/120h/142h连续性图像

0小时

12小时

24小时

48小时

72小时

96小时

120小时

148小时

  3.3.2生长曲线图

  3.3.3细胞生长过程动态时序视频

 https://www.readcells.com/d/lianqingrq/uploadfile/202608/1_1,A1(46.4,35.1,5.14)_bf_20260826.avi 

注意：培养密度一般控制在40-60%的汇合度，过高的汇合度，细胞可能会开始分化：注意血清类型，一般使用的是新生牛血清培养，用胎牛血清生长速度会加快，容易使细胞分化：传代时铺板需均匀，不然会导致分化不均匀，分化比例低。