细胞聚团怎么办？

在细胞相关实验中，细胞培养遇到细胞聚团问题总是让人头疼不已。今天就来和大家聊聊细胞培养过程中出现聚团，如何分析原因并有效解决这个问题做一个简单科普推文分享。

细胞出现聚团现象，一般有两种情况会产生聚团现象。

一.细胞非正常聚团：

细胞培养条件不合适传代过程操作不当引起的，需要避免。

1. 细胞非正常聚团的隐患：细胞聚团不仅仅是形态上的变化，它会严重影响细胞的正常生长、代谢功能及实验结果的准确性。

1.1细胞聚团会导致细胞间营养和氧气交换受限，部分细胞因养分不足无法正常生长分裂；

1.2聚团细胞的生长状态往往不均匀，有的增殖旺盛，有的则处于休眠或濒死状态；

1.3细胞在聚团后常失去正常粘附状态，影响其功能表现，如分泌能力和代谢活性；

1.4在需要细胞与基质或其他细胞 相互作用的实验中，聚团会干扰这些生物学过程；

1.5聚团还可能导致细胞行为不一致，影响实验结果的可重复性。在药物筛选或功能研究中，聚团可能改变细胞对药物的反应，产生假阳性或假阴性结果。

2. 细胞非正常聚团的原因及解决方法：

2.1消化不当（消化过度和消化不足）：消化过程是导致细胞聚团的重要因素。消化过度(浓度过高或时间过长)会损伤细胞，影响其正常粘附能力；消化不足则会使细胞大片脱落，细胞间粘附仍然较强，难以分散成单细胞悬液。

解决方法：需要精准掌控消化时间，既要保证细胞充分解离，又要避免影响细胞状态。对于已聚团且状态良好的细胞，可进行消化处理以 获得单细胞悬液并重新接种。

2.2血清批次差异影响：不同品牌和批次的血清在成分上存在差异，尤其是生长因子的含量，这可能会对细胞粘附能力和生长状态产生影响，引发聚团。

解决方法：培养对血清敏感的细胞时，应尽量避免更换血清品牌和生产批次。如必须更换，建议采取逐步替换的方式。

2.3培养环境不稳定促使细胞“抱团取暖”：培养箱温度、湿度和CO?浓度不稳定会影响细胞正常代谢和生理功能，细胞为抵御不良环境而聚团。高密度培养时，细胞也容易出现聚团生长 。

解决方法 ：定期校准培养箱监测装置，确保环境稳定。通过预实验确定细胞最佳接种密度，避免过高密度，并及时传代。

2.4其他多种影响因素：离心速度过大或时间过长也容易造成细胞抱团。细胞状态不好、老化(如换液不及时、长得太满才传代、污染等)可能出现抱团；污染：某些细菌和真菌病原体会导致细胞溶解，结块通常是细胞培养物被污染的迹象等

解决方法 ：规范消化和传代的操作；适当的延长离心的时间不失为一种较好的将悬浮聚团细胞离心散开的方法，但转速及时间要通过实验来把握；对于已形成的细胞团，可尝试温和机械方法分散，如用移液器轻轻吹打聚团部位。对于较紧密的聚团，可使用低浓度胰或其他解离酶 (如胶原酶)短时间处理。让细胞静置片刻，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。

二.细胞正常聚团：

细胞本身特性决定的，部分细胞就是聚团生长的(如ELLImage Mini全自动活细胞成像仪监测拍摄的细胞图片），聚团才正常。

 

部分的细胞具有天生的聚团现象，比如大部分的半悬浮细胞，BV-2 ,NCI-H716等等，半悬浮细胞一般在在整体汇合度70%左右就要进行传代操作了，这样可以降低细胞聚成大团块的风险。

三.实验总结：

通过CELLImage 全自动活细胞成像仪监测这种具有聚团现象的细胞生长，可以更加直观地了解细胞特性，以及实验传代处理时间节点。CELLImage Mini全自动活细胞成像仪不仅能够动态监测细胞实验全程的生长变化信息，揭示细胞杀伤、分裂、迁移等生命活动的细微变化过程，记录实验过程中关键信息，实现动态研究调控物质对细胞的影响；而且支持红绿蓝三通道荧光拍摄，对于一些稳转细胞株构建、监测细胞荧光表达、凋亡监测、荧光染料染色实验帮助极大。活细胞动态监测技术实验全程不耗费人力，所有细胞图像的拍摄记录都可以由设备独立完成，实现全自动，高通量，长期稳定性和低干扰的结合。