Sh-sy5y细胞背景介绍：

人神经母细胞瘤细胞是来源于儿童常见恶性肿瘤——神经母细胞瘤的恶性细胞。它们起源于胚胎期神经嵴前体细胞的分化障碍，具有高度异质性、未分化特性和独特的分子特征（如MYCN扩增）。其临床行为差异巨大，从高度侵袭转移到自发消退均可能发生，是儿童癌症研究和治疗的重要对象。SH-SY5Y细胞是SK-N-SH细胞系经3次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)，母株SK-N-SH细胞是1970年来源于4岁女性患者骨瘤转移灶的神经母细胞瘤。SH-SY5Y细胞具有中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性，细胞生长饱和密度大于1×10^6/cm^2。SH-SY5Y细胞可以用于3D细胞培养、高通量筛选、免疫学、神经科学、毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。

Sh-sy5y细胞信息简介：

中文名称 ：人神经母细胞瘤细胞。

细胞简称 ：Sh-sy5y。

细胞形态 ：上皮细胞样。

生长特性 ：多数贴壁、少数悬浮。

传代比例：1:2~1:4。

换液频率：1~2次/周。

培养环境 ：5%CO2 在37℃培养。

冻存条件 ：无血清冻存液 冻存于液氮。

完全培养基 ：43%MEM＋+43%F12+10% FBS＋1% P /S+1%丙酮酸钠+1%GlutaMAX+1%MEM NEAA（非必需氨基酸）。

Sh-sy5y细胞特点：

（1）该细胞生长特性为多数贴壁，少数悬浮；

（2）喜欢聚团生长，CELLImage Mini全自动活细胞成像仪观察Sh-sy5y细胞簇如下图；

（3）细胞增殖缓慢，且喜欢聚团生长，镜下观察融合率较低，需要5-7天才能达到80%以上的融合率；如果细胞培养一周都无法传代，建议把细胞消化下来，接种到更小的孔板中，增加细胞密度，促进细胞生长。

Sh-sy5y细胞传代实验：

实验时间：2025年06月13日 14：10-15：13。

实验设备及厂家：CELLImage Mini全自动活细胞成像仪（联庆瑞奇）、离心机（国产）、恒温水浴锅（国产）。

实验耗材及厂家：六孔板（国产）

实验试剂：培养基（逸漠生物）、胎牛血清（逸漠生物）、青链霉素溶液（逸漠生物）、胰蛋白酶（逸漠生物）。

细胞类型：Sh-sy5y（逸漠生物）。

Sh-sy5y传代步骤：

（1）实验准备：将配好的Sh-sy5y培养基和胰蛋白酶从2-8℃ 中取出放置到水浴箱预热 30 min 左右。并对生物安全柜紫外照射消杀30min；

（2）观察细胞：将细胞放置于CELLImage Mini全自动活细胞成像仪观察细胞的状态及密度，细胞融合度达到 70%-90%即可进行传代（如下图所示）；

（3）洗涤细胞：将六孔板里的原有培养液收集于15ml离心管，用 1×PBS洗涤细胞两次，去除残余的培养液和血清；

（4）消化细胞：每孔加入100ul胰酶溶液，室温消化0.5-1min，轻轻拍打六孔板两侧会有细胞明显脱离，立即终止消化；

（5）终止消化：加入2ml完全培养液终止消化，吹打六孔板底 2-3 次使所有细胞彻底脱壁。将细胞悬浮液到 15 mL 离心管中，做好标记；

（6）细胞离心：在室温条件下，将细胞于1000rpm离心5min；

（7）细胞重悬：离心后，在生物安全柜内小心倒去上清，用吸管吸取2 mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液；

（8）细胞计数：取少量单细胞悬液进行台盼蓝染色，于CELLImage Mini全自动活细胞成像仪进行拍照计数；

（9）细胞传代：根据计数结果，将Sh-sy5y细胞传入六孔板中，每孔补足2ml完全培养基；

（10）细胞培养及监测：在六孔板对应孔写上细胞名称、复苏日期，放置37°C、5%CO2 饱和湿度培养箱内培养。用CELLImage Mini全自动活细胞成像仪对细胞每间隔60min进行一次图像采集，持续监测细胞直至下一次传代。

下图依次是1h/12h/24h/36h/48h/60h/72h连续性图像及生长曲线

实验总结：

CELLImage Mini全自动活细胞成像仪不仅能够动态监测细胞实验全程的生长变化信息，揭示细胞杀伤、分裂、迁移等生命活动的细微变化过程，记录实验过程中关键信息，实现动态研究调控物质对细胞的影响；而且支持红绿蓝三通道荧光拍摄，对于一些稳转细胞株构建、监测细胞荧光表达、凋亡监测、荧光染料染色实验帮助极大。活细胞动态监测技术实验全程不耗费人力，所有细胞图像的拍摄记录都可以由设备独立完成，实现全自动，高通量，长期稳定性和低干扰的结合。