一.什么是小鼠肺类器官？

小鼠肺类器官是从小鼠肺组织中分离得到肺上皮干 / 祖细胞，借助三维基质胶与专用培养基体外培养，由细胞自主组装、分化形成的微型三维结构，能够模拟小鼠气道、肺泡的细胞构成与部分生理特征，常被用作肺部发育、疾病机制探究和药物筛选的体外实验模型。

二. 小鼠肺类器官的应用

小鼠肺类器官可模拟肺部正常结构与病理状态，主要用于研究小鼠肺组织的发育规律、损伤修复及呼吸道疾病发病机制，同时也适用于药物药效、毒性筛选和基因功能探究，是替代活体动物开展肺部相关实验的重要体外模型。

三.构建小鼠肺类器官的方法

为了帮助大家更好的了解类器官的构建，实验老师收集现在市场上已有的类器官构建技术，和大家分享一下原代肺类器官的构建培养流程，希望对大家有帮助。

以下是我们小鼠小肠肺类器官的实验过程和实验图像采集及图像效果、分析结果。

实验时间：2026年04月30日

实验设备：CELLImage Mini全自动活细胞成像仪（联庆瑞奇）

实验试剂：类器官组织消化液（逸漠生物）、类器官专用基础培养基（逸漠生物）、小鼠肺类器官完全培养基（逸漠生物）、基质胶（逸漠生物）

细胞类型：小鼠肺组织（逸漠生物）

1.实验过程：

1.1组织清洗：将小鼠肺组织置于组织保存液4°保存运输；将标本使用含双抗类器官专用基础培养基进行清洗，反复涮洗约5-10次，涮洗至清洗液澄清，去除清洗液，将组织置于含 PBS的6cm细胞培养皿中，用类器官专用基础培养基清洗3遍；

1.2机械分离：之后将肺组织剪随成3mm-5mm大小，用镊子将组织转移至15ml离心管；

1.3组织消化：加入约10倍样本体积的完全组织消化液(一般加入10mL)，置37℃摇床上，80rpm，消化30min。每隔10min取出吹打，将消化组织团块分散；

1.4终止过筛：消化完成后，加入5%血清终止，将消化液过70um细胞筛网去除组织块，并用类器官专用基础培养基冲洗。400g离心5min收集细胞沉淀；

1.5点胶铺板：根据细胞数量，取种板细胞体积的3倍体积基质胶混匀，吸取25μL混悬液,加入到48孔板中的中心部位；将48孔板倒置于细胞培养箱中10min；

1.6加完全培养基：用枪头沿着孔壁轻轻加入250uL小鼠胃类器官完全培养基，将48孔板置于37°C二氧化碳培养箱中培养。每3~4天更换一次培养基，更换培养基时应避免破坏基质胶。

2.密切监测肺类器官生长状态：

将铺有小鼠肺类器官的48孔板放置于37℃，5%CO2，90%左右湿度条件的培养箱中CELLImage Mini全自动活细胞成像仪的适配器上，通过Readcells软件设置间隔4h拍摄一次Z轴叠加，焦点间距30um，向上层扫30层，采集图像总周期数36次，监测总时间为144h。

3.实验图像展示：

3.1 小鼠肺类器官图像：

小鼠肺类器官不同时间Z轴叠加图像

3.2 小鼠肺类器官Z轴叠加动态视频：