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活细胞成像在小鼠小肠原代类器官构建实验中的应用
什么是类器官?
类器官(Organoid)是成体干细胞、胚胎干细胞或诱导多能干细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成的体外三维结构,能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能,也称为微器官或组织类似物。目前类器官分为两类:组织来源类器官和多能干细胞来源类器官。

类器官为什么是热点?
类器官的爆发是技术成熟(干细胞技术+生物材料)+ 临床需求(精准医疗)+ 资本驱动共同作用的结果。它不仅能高度模拟真实器官,弥补传统模型的缺陷,随着培养技术(如基质胶、微流控芯片)的优化,类器官可实现高通量培养,而且类器官与人工智能、基因编辑等技术的融合,使其在发病机制研究、药物研发与毒性测试、再生医学与器官移植潜力、基因编辑与精准医疗等方面的应用,未来医疗范式转型的核心——从“试错医疗”走向“模拟预测医疗”,并可能重塑生物医药行业的研发路径。
怎么构建类器官?
为了帮助大家更好的了解类器官的构建,实验老师收集现在市场上已有的类器官构建技术,,和大家分享一下原代类器官的构建流程,希望对大家有帮助。 以下是我们小鼠小肠原代类器官的实验过程和实验图像采集及图像效果、分析结果。
实验时间:2026年01月25日
实验设备:CELLImage 全自动活细胞成像仪(联庆瑞奇)
实验试剂:类器官组织消化液(逸漠生物)、类器官专用基础培养基(逸漠生物)、小鼠小肠完全培养基(逸漠生物)、基质胶(逸漠生物)
细胞类型:小鼠小肠组织(逸漠生物)
1.实验过程
1.1组织清洗:将小鼠小肠组织置于组织保存液4°保存运输;将标本使用含双抗类器官专用基础培养基进行清洗,反复涮洗约5-10次,涮洗至清洗液澄清,去除清洗液,将组织置于含 PBS的6cm细胞培养皿中,沿肠长轴剪开,后用玻片将肠道内部绒毛轻轻刮干净(注意内外不要混淆,绒毛会影响后续类器官生长),用类器官专用基础培养基清洗3遍;
1.2机械分离:之后将小肠剪随成3mm-5mm大小,用镊子将组织转移至15ml离心管;
1.3组织消化:加入约10倍样本体积的完全组织消化液(一般加入10mL),置37℃摇床上,80rpm,消化30min。每隔10min取出吹打,将消化组织团块分散;
1.4终止过筛:消化完成后,加入5%血清终止,将消化液过70um细胞筛网去除组织块,并用类器官专用基础培养基冲洗。400g离心5min收集细胞沉淀;
1.5点胶铺板:根据细胞数量,取种板细胞体积的3倍体积基质胶混匀,吸取25μL混悬液,加入到48孔板中的中心部位;将48孔板倒置于细胞培养箱中10min;
1.6加完全培养基:用枪头沿着孔壁轻轻加入250uL小鼠小肠类器官完全培养基,将48孔板置于37°C二氧化碳培养箱中培养。每3~4天更换一次培养基,更换培养基时应避免破坏基质胶。
2.密切监测小肠类器官生长状态
将铺有小鼠小肠类器官的48孔板放置于37℃,5%CO2,90%左右湿度条件的培养箱中CELLImage Mini全自动活细胞成像仪的适配器上,通过Readcells软件设置间隔3h拍摄一次Z轴叠加,焦点间距30um,上下各拍50层,采集图像总周期数32次,监测总时间为96h。
3.实验图像展示
3.1 小鼠小肠类器官图像
小鼠小肠类器官不同时间Z轴叠加图像
3.2 小鼠小肠类器官Z轴叠加动态视频
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4.实验总结
CELLImage 全自动活细胞成像仪在细胞培养箱内实现动态监测2D细胞、3D细胞(类器官、肿瘤球等)实验全程的生长变化信息,实现动态研究调控物质对细胞的影响;支持红绿蓝三通道荧光,记录细胞中不同荧光标签的动态变化;支持活细胞Z轴层扫叠加、大图拼接,实现多层次、大范围记录3D细胞(类器官、肿瘤球等)的变化信息;搭配多种扫描模式、AI分析功能,实现细胞培养箱内细胞实验的智能管理,全自动、长时程、高通量、无干扰的记录细胞生长变化并分析图像信息,快来联系我们体验吧。



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