在细胞生物学研究中，为了更好而长期地研究细胞生物学功能，需要将良好状态的细胞保存起来，以备将来使用！

我们实验室也不例外，春节前将转染慢病毒的293T细胞冻存后放入-20℃冰箱程序降温，回家归心似箭忘记转入液氮中，节后实验小姐姐抱着好奇心想看看细胞冻存后在-20℃放置十天会咋样,对冻存的细胞按照标准操作进行了细胞复苏。

将复苏后的细胞放置于CELLImage全自动活细胞成像仪10X镜头上，进行观察拍照，图像如下：

293T-GFP复苏0h：

293T-GFP复苏6h：

293T-GFP复苏12h：

293T-GFP复苏18h：

通过小编用CELLImage全自动活细胞成像仪在培养箱内拍摄的293T-GFP细胞复苏后不同时段图像，大家可以看到细胞基本上完全趋于死亡，说明细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。

冻存细胞正确的程序性降温环节供大家参考：首先 ﹣4 ℃ 30 分钟，20 ℃ 30 分钟，﹣80 ℃过夜，最后进行液氮保存。

另有一种比较实用的降温方法：用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹，扎紧，直接放入-70 ℃冰箱，隔夜取出冻存管直接放液氮冻存。或直接采用程序性降温盒更为方便。

细胞冻存的原理则是随着温度降低，细胞内的酶活性会逐渐降低，当温度到-70℃左右，酶活性几乎为0，代谢活动停止；到-130℃左右，细胞能达到最佳活率；在液氮中-196℃左右可以实现长期保存。然而，随着温度降低，细胞内外的水分也会“结冰”并形成冰晶，冰晶能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。因此常加入冷冻保护剂甘油或二甲基亚砜（DMSO）。DMSO能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻存过程，同时增加细胞膜的通透性，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而达到保护细胞的目的。

言归正传，通过CELLImage全自动活细胞成像仪观察-20℃冻存的细胞复苏后的状态，不仅让大家实时观察到错误冻存细胞后细胞的状态，也让大家认识到不规范操作对细胞的损伤是不可逆的，CELLImage全自动活细胞成像仪为您的生物细胞实验保驾护航，值得各位细胞生物研究工作者拥有！